在生物化学领域，高柠檬酸合酶（Homocitrate synthase）是一种可催化高柠檬酸（2-羟基-1,2,4-三羧酸）合成的酶。催化如下化学反应：

在一些真菌和特定古生菌中，高柠檬酸合酶摧化赖氨酸生物合成中的第一步，也是关键的一步反应。高柠檬酸合酶是由两个相同的亚基组成，靠氮和碳末端的域交换稳定结构，氮末端的催化域由TIM桶折叠组成，底物在二价金属离子的协助下通过氢键与活性部位相连。碳末端结构域由α/β结构组成，在高柠檬酸合酶与一个底物结合后，一个由碳末端结构域组成的盖子模序阻碍了底物与相邻单体活性部位的结合。在酶结合两个底物分子后，这个盖子模序就消失了。这说明酶可以通过改变表面的柔性来调节底物与活性部位的结合。无论在体内还是体外，活性位点的变异导致底物与酶结合的减弱与酸碱催化活性的减弱。

In enzymology, a homocitrate synthase (EC2.3.3.14) is an enzyme that catalyzes the chemical reaction

The 3 substrates of this enzyme are acetyl-CoA, H₂O, and 2-oxoglutarate, whereas its two products are (R)-2-hydroxybutane-1,2,4-tricarboxylate and CoA.